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    細胞凋亡實驗(流式法或Tunel法)

     
    商品編號:
    JSY-008
    品牌:
    金益柏
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    0
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    產品介紹Product Description

    規格:

    分類:生化檢測

    儲存條件:

    用途:

    注意事項:

    一、服務介紹

    ? ? ? ?細胞凋亡是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,它并不是病理條件下,自體損傷的一種現象,而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象,在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型,而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。凋亡是多基因嚴格控制的過程。

    二、實驗原理

    ? ? ? ??Annexin V/PI雙染檢測細胞凋亡:在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素標記,以標記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin VPI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

    三、實驗流程

    1.細胞培養,接種6孔板;

    2.按指定的方式誘導細胞凋亡;

    3.不含EDTA的胰酶消化貼壁細胞并離心收集;

    4.重懸細胞,加Annexin V/PI染色;

    5.流式細胞儀檢測;

    6.結果統計分析。?

    四、服務說明

    1.客戶提供:培養好的細胞以及所需藥品

    2.公司提供:基本實驗步驟、流式圖片、數據分析結果、剩余藥品。

    3.實驗周期:?1-2周左右,具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。


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    TUNEL

    二、實驗原理

    ? ? ? ?TUNEL法(terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling,末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP 缺口末端標記測定法),也稱DNA斷裂的原位末端標記法。細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的分階段的過程,染色體DNA首先在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段,然后大約30%的染色體DNACa2+Mg2+依賴的核酸內切酶作用下,在核小體單位之間被隨機切斷,形成180200 bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現缺口而產生的一系列DNA3’-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標記到DNA3’-末端,再用辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素與衍生物上生物素結合(每個鏈霉親和素至少可以再結合3個生物素分子),最后用DAB、過氧化氫與辣根過氧化物酶發生氧化、環化反應,形成苯乙肼聚合物而呈現棕褐色,最終通過計數每張切片上不同視野中TUNEL陽性細胞的比例來判斷細胞凋亡發生情況。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3’-OH形成,很少能夠被染色。

    三、實驗流程

    1.收集處理后的細胞或石蠟切片脫蠟至水。

    2.過氧化氫甲醇中浸洗,抑制內源性過氧化氫酶。

    3.用蛋白酶K室溫孵育15~30分鐘。

    4.滴加TUNEL反應混合液(即配即用,4oC避光),孵育60分鐘,在熒光鏡下(綠色)分析結果。

    5.加入轉化劑-POD,孵育20~30 min。

    6.加入DAB底物溶液,孵育5~10 min。

    8.中性樹膠或者甘油封片,光鏡下分析結果。

    四、服務說明

    1.客戶提供:培養好的細胞以及所需藥品;或者提供石蠟標本

    2.公司提供:基本實驗步驟、圖片、數據分析結果、剩余藥品

    3.實驗周期:?2-3周左右,具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。

    電話:025-86228208 | 傳真:025-86228208 | 電子郵件:lixlae@126.com 站長統計
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